PCR Troubleshooting and Optimization: The Essential Guide
Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) ist ein grundlegendes Instrument in der wissenschaftlichen Forschung und bei klinischen Tests. Die Echtzeit-PCR, die Vervielfältigung und Nachweis in einem Gerät vereint, ist eine schnelle und genaue Methode zum Nachweis und zur Quantifizierung von Nukleinsäuren.
Obwohl die PCR ein sehr leistungsfähiges Verfahren ist, sind die erzielten Ergebnisse nur dann gültig, wenn die entsprechenden Kontrollen verwendet wurden. Darüber hinaus ist eine angemessene Optimierung der PCR-Bedingungen erforderlich, um spezifische, wiederholbare, reproduzierbare und empfindliche Daten zu erhalten. In diesem Buch werden die Strategien zur Vorbereitung effektiver Kontrollen und Standards für die PCR erörtert, wann sie eingesetzt werden sollten und wie die von ihnen gelieferten Informationen zu interpretieren sind.
Es hebt die Bedeutung der Optimierung für die Effizienz, Präzision und Empfindlichkeit der PCR-Methodik hervor und bietet wichtige Anleitungen für die Fehlersuche bei ineffizienten Reaktionen. PCR-Experten beschreiben Design- und Optimierungstechniken, erörtern die Verwendung geeigneter Kontrollen, erläutern die Bedeutung von Standardkurven und untersuchen die Prinzipien und Strategien, die für eine effektive Fehlersuche erforderlich sind.
Das Buch hebt die Bedeutung der Probenvorbereitung und -qualität, des Primerdesigns, der Kontrolle von Inhibitoren, der Vermeidung von Amplikon- und Umweltkontaminationen, der Optimierung der Reagenzienqualität und -konzentration sowie der Modifizierung des Thermocycling-Protokolls für optimale Empfindlichkeit und Spezifität hervor. Darüber hinaus werden in speziellen Kapiteln die Geschichte der PCR, die Wahl der Geräte, die Anwendungen der PCR in der Metagenomik, die hochauflösende Schmelzanalyse, die MIQE-Richtlinien und die PCR im Mikrolitermaßstab behandelt.
Die Strategien, Tipps und Ratschläge in diesem knappen Band ermöglichen es dem Wissenschaftler, eine Vielzahl von Techniken zu optimieren und effektiv zu beheben, darunter PCR, reverse Transkriptase-PCR, Echtzeit-PCR und quantitative PCR. Es ist ein unverzichtbares Buch für jeden, der die PCR-Technologie einsetzt.
| ISBN: | 9781904455721 |
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| Sprache: | Englisch |
| Einband: | Hardcover |
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